酸奶中有機(jī)酸檢測(cè)的固相萃取方法

酸奶中有機(jī)酸的介紹：

酸奶是以牛奶為原料，經(jīng)發(fā)酵之后的一種牛奶制品。有機(jī)酸是酸乳中的重要因素，具有抑菌、抗病毒等作用。有機(jī)酸不僅是酸乳發(fā)酵的重要指標(biāo)，也是酸乳的主要風(fēng)味和營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)之一和天然防腐劑，其含量高低于酸乳的品質(zhì)有密切關(guān)系。

《GB 5009.157-2016食品中有機(jī)酸的測(cè)定》規(guī)定了食品中酒石酸、乳酸、檸檬酸等七種有機(jī)酸的檢測(cè)方法。有機(jī)酸是目前食品領(lǐng)域內(nèi)采用的比較普遍的酸味劑，可以提高食品的風(fēng)味，食品中一部分的有機(jī)酸是食品中固有的或者是工藝中形成的，但是仍然有一部分有機(jī)酸是人為添加的，因此檢測(cè)食品中的有機(jī)酸的含量是很有必要的。

中檢維康生物根據(jù)《GB5009.157-2016食品中有機(jī)酸的測(cè)定》，利用Clover® SAX固相萃取柱作為酸奶中有機(jī)酸檢測(cè)的樣品前處理方法，HPLC法為檢測(cè)手段，開發(fā)出酸奶中有機(jī)酸的測(cè)試方法。

實(shí)驗(yàn)耗材：

Clover® SAX固相萃取柱1000mg/6mL(貨號(hào)：SAX10006)

樣品前處理：

準(zhǔn)確移取酸奶5.0 g于50 mL離心管中加入水至50 mL渦旋1 min分散均勻。4500 r / min離心10 min。取上清液5 mL，備用。

SPE柱凈化：

1.活化： Clover® SAX固相萃取柱使用前用6 mL甲醇、6 mL 水活化；

2.上樣和洗脫：往固相萃取柱中加入提取備用液，棄去流出液；加入 5 mL 水淋洗，棄去淋洗液；2 mL 固相萃取柱洗脫液（6% 鹽酸 - 水溶液）洗脫，收集洗脫液。（整個(gè)上樣淋洗洗脫過(guò)程中流速保持 <1 mL/min）

3. 重新定容： 洗 脫 液 定 容 至 2 mL，0.22 µm 濾 膜 過(guò) 濾，供HPLC上樣測(cè)試。

HPLC條件：

· 設(shè)備：Waters Alliance 2695

· 色譜柱 ：Clover® C18色譜柱 (4.6×250mm)

· 檢測(cè)器 ：Waters 2487 紫外檢測(cè)器

· 流動(dòng)相： A：甲醇   B：0.025 mol/L磷酸二氫鉀（PH：2.5）

· 等度洗脫 ： A： B=5：95

· 流速：1.0 mL/min

· 檢測(cè)波長(zhǎng)：214 nm

· 進(jìn)樣體積:20 μL

實(shí)驗(yàn)結(jié)果：

0.2mg/Kg 酸奶中有機(jī)酸的添加回收結(jié)果

實(shí)驗(yàn)結(jié)論：

采用Clover® SAX固相萃取柱可以有效的用于酸奶中的有機(jī)酸含量的測(cè)定，酒石酸和檸檬酸檢測(cè)的回收率在85-95%左右，符合國(guó)標(biāo)的標(biāo)準(zhǔn)要求。同時(shí)，Clover® SAX固相萃取柱仍然可以用來(lái)作為食品中的其他固體、液體等基質(zhì)中的有機(jī)酸的測(cè)定。

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